原代细胞转染不进去原代细胞转染效率低( 二 )

我有一本书专门讲这个！
“生物化学”如何做好细胞转染实验？1.首先要准备所需的材料
①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA 。
②转染试剂和动物。
③进行注射的器材。
2.试剂的使用量
3.注射途径等，做之前多看一些文献。（转自英格恩生物公众号）
影响细胞转染效果的因素
(1) 细胞密度

细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定 *** ，包括适当的接种量和培养时间等。阳离子脂质体试剂具有微量的细胞毒性而往往需要更高的铺板密度或者更多的悬浮细胞数，有的要求细胞达到90%汇合度；而研究细胞周期等表达周期长的基因，就需要较低的铺板密度，所以需要选择能够在较低铺板密度下进行转染的试剂。一般转染时贴壁细胞密度大致为50%-90%，但这个需要参考所选转染试剂的说明书。

(2) 细胞生长状态

这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代、生长状态良好的细胞系。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛,最容易转染。

(3) 细胞种类、转染试剂、转染 ***

不同细胞种类的细胞在做转染时转染效率通常不同，因此所需要的转染体系是不同的，不能一种转染体系用在所有类型细胞的转染实验。实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都有不同的转染 *** ，但大都大同小异，同时目前产品都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。另外，在大规模使用前，仍需进行转染试剂和核酸最优比例的实践摸索。

(4) 核酸类型及质量

用于转染的核酸类型一般有质粒DNA、mRNA 、sirNA和miRNA，针对不同的核酸一般采用不同的转染试剂和转染 ***。另外在制备高纯度DNA时，还需要对DNA进行内毒素的去除，内毒素的存在会造成细胞毒性，严重影响转染效率。同时DNA质量对转染的效果影响也非常大，一般转染技术是基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，带有污染物都会显著影响转染复合物的的形成。

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